2.4.2 结果与分析-凯发娱乐
1.菌株16s rdna序列扩增
ctab法提取乳酸菌的dna，结果如图2-15所示，各菌株基因组dna均在15 000 bp之上，且条带清晰明亮，证明提取到符合实验要求的dna，用于扩增乳酸菌的16s rdna[12]。
图2-15 乳酸菌基因组dna琼脂糖凝胶电泳
m—dl15000bp dna marker；1—hbuas51131；2—hbuas51132；3—hbuas51133；4—hbuas51134；5—hbuas51135；6—hbuas51136；7—hbuas51137；8—hbuas51141；9—hbuas51142；10—hbuas51143；11—hbuas51144；12—hbuas51145；13—hbuas51146；14—hbuas51147；15—hbuas51148
乳酸菌16s rdna pcr扩增产物琼脂糖凝胶电泳检测的结果如图2-16所示，各泳道在1 500 bp左右的位置都出现了一条明显的亮带，证明各菌株目标片段均被成功扩增。用清洁试剂盒对pcr产物进行清洁，克隆后挑选阳性克隆子送往武汉天一辉远生物科技有限公司测序。
图2-16 乳酸菌16s rdna的pcr产物琼脂糖凝胶电泳图m—dl2000bp dna marker
2.乳酸菌16s rdna序列及系统发育分析
测序后所得序列进行拼接，在ncbi上进行同源比对。与模式菌株相比，相似度大于99%的细菌判定为同种；相似度介于95%～99%判定为同属；相似度在91%～95%判定为同科[10]。恩施鲊广椒的15株乳酸菌与其对应的模式菌株相似度为99%或100%，表明乳酸菌均已鉴定到种的水平[13]。乳酸菌16s rdna序列同源性比对分析结果如表2-12所示。
表2-12 乳酸菌16s rdna 序列分析结果
续表
对恩施鲊广椒中的乳酸菌进行聚类分析，结果如图2-17所示。hubas51131、hubas51132、hubas51133、hubas51134、hubas51135、hubas51136、hubas51141、hubas51145、hubas51146和hubas51147等10株乳酸菌与植物乳杆菌（lactobacillus plantarum）模式菌株聚在一起；hbuas51142、hbuas51144和hbuas51148等3株乳酸菌与发酵乳杆菌（lactobacillus fermentum）聚在一起；乳酸菌hbuas51137与副干酪乳杆菌（lactobacillus paracasei）聚在一起；乳酸菌hbuas51143与食品乳杆菌（lactobacillus alimentarius）聚在一起。由此可推断，l.plantarum为恩施鲊广椒中的优势菌，占菌株总数的66.67%。(https://www.daowen.com)
图2-17 乳酸菌16s rdna序列系统发育树
3.基于电子鼻分析
鲊广椒不同时间的响应值分析如图2-18所示，传感器w1c（对芳香类物质灵敏）、w3c（对氨气、芳香类物质灵敏）和w5c（对烷烃、芳香类物质灵敏）的响应值呈下降趋势，传感器w1w（对有机硫化物、萜类物质灵敏）和w1s（对甲烷灵敏）响应值呈明显的上升趋势。
图2-18 不同时间鲊广椒的电子鼻传感器时间-强度动态响应
电子鼻有十根传感器，不同传感器对鲊广椒呈现不同的响应。由图2-18可知，不同时间传感器信号强度响应值的变化趋势：w1w对鲊广椒的响应值最高，w1s、w5s、w2s和w2w响应值次之，w2s、w6s、w3c、w5c和w1c响应值偏低。鲊广椒的信号强度在45～55 s趋于平稳，本研究选取49 s、50 s、51 s的测量数据作为参考值，取3个数据的平均值进行pca分析。
pca是将提取的传感器响应值信号进行数据转换和降维，对降维后的特征向量进行线性分类，pc1和pc2上包含了在pca转换中得到的第一主成分和第二主成分的方差贡献率。方差贡献率越大，说明此主要成分可以较好地反映原来多指标的信息[14]。一般情况下，总贡献率超过70%～80%的方法即可使用[15]。基于电子鼻技术pc1和pc2的因子载荷图如图2-19所示。
图2-19 基于pca的pc1和pc2的因子载荷图
由图2-19可知，第一主成分和第二主成分的贡献率总计达94.05%，基本能够反映原始数据的全部信息。第一主成分包括w1c、w1w、w6s、w2w、w3s、w2s和w1s，贡献率83.46%；第二主成分包括w5c、w3c、和w5s，贡献率为10.59%。基于电子鼻技术pc1和pc2的因子得分图如图2-20所示。
图2-20 基于pca的pc1和pc2的因子得分图
由图2-20可知，添加乳酸菌组均分布于第一、二、三象限中，对照则处于第四象限。由此可知，添加乳酸菌组与对照组的差异性较大。与对照相比，添加乳酸菌组的鲊广椒芳香性物质含量更高，氮氧化物、氢化物、有机硫化合物和烷烃等物质含量显著降低。结合图2-19、图2-20分析可知，不同乳酸菌对鲊广椒的影响也存在较为显著的差异，乳酸菌hubas51132和hubas51141分布于第二象限，芳香类物质含量明显更高；乳酸菌hubas51134、hubas51147、hubas51133和hubas51131分布于第一象限，氢气、乙醇、烷烃、有机硫化物和萜类物质等物质含量更高。由此可见，利用hubas51132和hubas51141两株乳酸菌制作的鲊广椒芳香性更好。